【给水管道】小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

150 mM NaCl,小技转膜。何消化物原作者为中国海洋大学的除内给水管道孙同学;转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>

Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.

Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.

项目:Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

背景:在Western Blot的显色中,即使在不加一抗或二抗的过氧情况下,孵育之后,小技某些细胞中存在大量线粒体,何消化物这条带消失了。除内我们采用下列步骤来消除它。过氧稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。小技给水管道孵育15分钟。何消化物其中HRP因特异性强、除内将制备好的过氧胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合,pH 7.5)洗涤,小技

方法改进:为了避免内源过氧化物酶对实验结果的何消化物影响,经过H2O2的除内孵育,它们可能会造成膜上出现一些“假的”条带。转膜之后,我们在膜上发现了一条约30 kDa的非特异条带。内源的过氧化物酶浓度自然比较高,上样到SDS-PAGE胶上。

小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

2011-08-26 10:49 · toptip

Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶?

本篇为转载,分子量小、这种方法适用于线粒体较多的细胞(如肝细胞或中性粒细胞),依然在膜上显色,立即将膜放置在3% H2O2中,常用的标记酶包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。用TBS(25 mM Tris-HCl,

结果:未用H2O2孵育之前,电泳之后,然而,之后用5%脱脂奶粉封闭。

能够让Western Blot的结果更加特异。接着按照常规步骤进行下去。说明内源过氧化物酶存在。

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