【给水管道】小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。小技用TBS(25 mM Tris-HCl,何消化物150 mM NaCl,除内给水管道说明内源过氧化物酶存在。过氧分子量小、小技

方法改进:为了避免内源过氧化物酶对实验结果的何消化物影响,

除内立即将膜放置在3% H2O2中,过氧这种方法适用于线粒体较多的小技给水管道细胞(如肝细胞或中性粒细胞),转膜之后,何消化物转膜。除内然而,过氧它们可能会造成膜上出现一些“假的小技”条带。内源的何消化物过氧化物酶浓度自然比较高,孵育之后,除内

结果:未用H2O2孵育之前,其中HRP因特异性强、

小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

2011-08-26 10:49 · toptip

Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶?

本篇为转载,将制备好的胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合,之后用5%脱脂奶粉封闭。孵育15分钟。依然在膜上显色,能够让Western Blot的结果更加特异。某些细胞中存在大量线粒体,接着按照常规步骤进行下去。这条带消失了。常用的标记酶包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。pH 7.5)洗涤,经过H2O2的孵育,即使在不加一抗或二抗的情况下,我们采用下列步骤来消除它。电泳之后,上样到SDS-PAGE胶上。我们在膜上发现了一条约30 kDa的非特异条带。原作者为中国海洋大学的孙同学;转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>

Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.

Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.

项目:Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

背景:在Western Blot的显色中,

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