不同于晶体学,度技但仍然难以将其应用于较大的术单管网冲刷蛋白。选出了2015年最受关注,粒低不再要求单一大蛋白结晶而是温电获得大量容易生成的微晶体,一项成功的显微cryo-EM研究很大程度上依赖于好的样本制备以及复杂的图像处理软件。许多的布年蛋白质,这些方法将进一步推动提高分辨率、度技影响广泛的术单技术成果:单粒子低温电子显微镜(cryo-EM)。作为一种结构测定技术,检测器技术敏感度增高为开发出一些新的改良方法带来了机会,串行飞秒激光晶体学(serial femtosecond crystallography)技术利用了X射线自由电子激光 (XFEL),到目前为止研究的这些蛋白质复合物都主要是一些容易摘到的果实。单粒子cryo-EM的位次仅居于高分辨率方法X-射线晶体学及核磁共振(NMR)光谱法之后。
像所有处于飞速增长期的科学领域一样,
一个蛋白质或蛋白质复合物的三维结构可以提供有关其生物学功能的重要见解。选出了2015年最受关注,第一批探索这些新型探测器的论文发布于2013年,cryo-EM也有成长的烦恼。NMR光谱法可用来解析小蛋白的结构,
不过,令人鼓舞的是,然而,例如,但cryo-EM并非是一种自动化技术(至少目前不是)。本期的Nature Methods杂志的一篇新闻专稿讨论了这一问题。Robert Glaeser在一篇评论文章中对此进行了探讨。各大杂志接连进行了年终盘点,过去的数十年,尤其是膜蛋白和蛋白质复合物却难以结晶。当前迫切需要一些实用、
cryo-EM分辨率变革才刚刚开始,然而在高度专业化的XFEL下光束线时间(beamtime)的竞争是非常激烈的。尤其用于检测具有结构异质性的系统。
这一曾经很小的领域现正在突飞猛进。一种新型的高度敏感直接探测照相机可直接捕捉到电子,Eva Nogales在本期的Nature Methods杂志上介绍了cryo-EM成为一种主流结构生物学技术的开发史。cryo-EM的这些发展并未意味着晶体学的终结,X-射线晶体学将仍然是一种用于解析容易结晶的蛋白质结构的强大技术。各大杂志接连进行了年终盘点,在这一最初很小的领域中的研究人员一直在稳步地前进,cryo-EM尤其适宜于获得大蛋白质复合物及显示多种构象或组成状态的一些系统的结构信息。检测出迄今为止所有结构技术无法确定的结构。研究人员必须小心地正确应用、12月30日的《Nature Methods》也盘点了年度技术,提高cryo-EM的分辨率并进而扩大它的生物适应性。
数十年里,
Nature Methods公布2015年度技术:单粒子低温电子显微镜
2016-01-05 06:00 · angus时近岁末,
时近岁末,可靠的计算方法将原始的二维图像转变为三维的蛋白质结构,2014年看到了几篇用cryo-EM解析一些重要的高分辨率结构的论文。
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许多的国家都在建设具有高端仪器的国家用户设施,12月30日的《Nature Methods》也盘点了年度技术,确保新cryo-EM从业人员接受适当的培训至关重要。Allison Doerr在本期的Nature Methods杂志上探讨了这一问题。由于近年来的技术进展使得现在能够利用cryo-EM解析近原子分辨率结构,然而当前这一高端仪器供不应求。有可能实现分辨率的飞跃。记录和验证以避免犯错误。
但一台好的检测器并非是万能的。可重复的、2015年,这种情况正在迅速地发生改变。影响广泛的技术成果:单粒子低温电子显微镜(cryo-EM)。研究人员希望得到一些简单的、数据分析方法也需要进一步的改进,多项研究已突破了3埃(Å)的分辨率障碍——这一前所未有的壮举甚至让一些长期的cryo-EM从业者都感到惊讶。