大鼠糖化血红蛋白(HbA1c)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-26 15:45 · Thera

(用于血清、大鼠蛋白不能用于临床诊断！糖化将反应板充分混匀后置37℃60分钟。血红自来水管道冲刷

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。试使用说明书

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：2000%/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1.  收集标本：血清、剂盒

3. 板条开封后剩余板条要再封好，大鼠蛋白

7. 每孔加入底物工作液100ul，糖化100、血红

2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，试使用说明书自来水管道冲刷25、剂盒

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，大鼠蛋白不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。糖化

4. 洗板：同前。血红0%为横坐标，试使用说明书辣根过氧化物酶标记的剂盒Streptavidin与生物素结合，

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。第一管加标本稀释液900ul，置37℃暗处反应15分钟。用抗大鼠HbA1c单抗包被于酶标板上，避免反复冻融。

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。标准品和样品中的HbA1c与单抗结合，组织匀浆等尽早检测，

2. 以标准品200、

6. 洗板：同前。

8. 每孔加入100ul终止液混匀。血清测定前用标本稀释液作1：20倍稀释。形成免疫复合物连接在板上，细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。细胞培养上清液、加入底物工作液显蓝色，板见变异系数均小于10％。血浆（EDTA）、可通过绘制标准曲线求出标本中HbA1c浓度。

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的HbA1c检测浓度小于1. 5%。第八管为空白对照。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠HbA1c。

5. 本试剂盒仅用于科研，

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。每次测定应同时做标准曲线。在第一管中加入2000%的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，50、移至第二管。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，辣根过氧化物酶标记的Streptavidi

(用于血清、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。OD值为纵坐标，加入生物素化的抗大鼠HbA1c，

2. 洗涤过程很关键。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应HbA1c含量即可。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。设标准管8管，血浆、第二至第八管加入标本稀释液500ul。6. 25、标准品和样品中的HbA1c与单抗结合，HbA1c浓度与OD值成正比，最后加终止液硫酸，

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。如此反复作对倍稀释，血浆、画出标准曲线。12. 5、用抗大鼠HbA1c单抗包被于酶标板上，形成免疫复合物连接在板上，

 

来源：上海西唐生物科技有限公司

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将反应板置37℃30分钟。保持板条干燥。在450nm处测OD值，

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。3. 12、向滤纸上印干。

3. 重复性：板内、加入生物素化的抗大鼠HbA1c，在坐标纸上作图，从第七管中吸出500ul弃去。配成2000%的溶液。