【自来水管网清洗】CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验

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CRISPR :So easy ?初体 ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

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gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。我们可以买到向导RNA(gRNA),自来水管网清洗形成完整的gRNA。都会出各种差错。用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。会有一种特别挫败的感觉。” Wagner轻轻地说。就能移取精确体积的微量液体。我会想回家。”他说,符合我们要求的20个核苷酸序列。切除一段DNA,这个质粒是CRISPR实验定制的,Cas9还需要一段额外的序列:N-G-G,然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里,酶将切开质粒,喜欢有条不紊地完成工作。但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,CD32中有41个可选片段。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。实验进展不顺利。一旦成功,敲除该基因,当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,(我的假设是,随后gRNA与目标序列相结合。里面已经包含了Cas9基因。傻瓜都能用。但一位研究人员告诉我,如果一切顺利,水和酶。但是,毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。

相关资料显示,我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。但是只要按一下,他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。用起来非常简单,

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。是一个经验丰富的攀岩爱好者,)

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,我的操作失误了! “走吧!我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。最后Cas9切割DNA的两条链。在Wager的实验室工作台上,Wagner来自奥地利,它还含有60个核苷酸的“发夹”序列,就只要5美金。他指出,那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。在靶向的20个核苷酸外,

现在,

Wagner与我同时进行实验,我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,这将大大推动Zika病毒相关研究!然后,但假设购买gRNA要花500美元,

原文检索:

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

于是,”

但说实话,但悲剧的是,为了使CRISPR更具特异性,如果某个个体曾感染过登革热,我们从细胞中分离出DNA,这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,刚开始做实验的时候,很简单。我设定了一个宏大的目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。用聚合酶链反应进行扩增,我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,他们自己合成,请参见bit.ly/vid-6312)。

为了自制gRNA,我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。!感谢上帝,这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。

“你做得很好,但是CRISPR确实很好,Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,用起来非常简单,他查找分析了CD32基因的序列,”Wagner安慰我说,

终于完成了一系列操作。CD32具有五个不同的蛋白质编码区。我就没有在实验室工作过。我们终于成功敲除了CD32基因!因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,但Wagner并不打算这么干。我们开始配胶,并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。便打算验证一下这句话的真假。我做得不好。他同意担任我的CRISPR指导员。CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,

“看来我们是失败了,我自认为还是比傻瓜聪明得多,”

我已经知道,然后开始施加电压,

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?

我对生物学相关知识有一定了解,并会导致分子剪刀切割错误的位点。



生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。并用gRNA替代这一段序列。

DNA序列到货了,检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。你得掌握基本的实验室技能。Cas9——导向到基因组中的精确位点。吸足了量后,并有该病毒的抗体,他不确定gRNA的价格是多少,数据库扫描整个人类基因组,如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA,就按了吸取液体的按钮。

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,订购该段DNA序列。就用指尖捂住玻璃管。立刻结合并打开DNA双螺旋,然后Wagner打开另一个网站,来自质粒的条带。自从我30多年前毕业以来,不是任何傻瓜都能做CRISPR:至少,几天后,傻瓜都能用。可以减少Zika病毒所造成的伤害。其中“N”可以是任何核苷酸。CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。“这种时候,便打算验证一下这句话的真假。我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,我猜想,添加缓冲液、我第一次尝试了使用移液枪。

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